尊龙凯时推出的产品名称为pEGFP-ADRB2（human）质粒，规格为0.5微克的质粒干粉。收到该产品后，请根据管壁标签确实判断产品形式，并在扩增前认真查阅质粒菌株的抗性、感受态及培养温度。

EGFP-ADRB2（human）质粒扩增步骤

当您收到质粒干粉后，首先进行5000 rpm离心1分钟，接着加入20微升去离子水（ddH₂O）来溶解质粒。然后，取出100微升的感受态细胞在冰上解冻10分钟，加入2微升质粒，冰浴30分钟后，在42℃热激60秒（注意此时不要搅动），随后再进行冰浴2分钟。之后加入900微升无抗LB液体培养基，在37℃、180 rpm下培养45分钟。

将培养液以6000 rpm离心5分钟，仅留100微升上清液重悬细菌沉淀，并将其涂布至目标质粒抗性的LB平板上。您可以使用尊龙凯时提供的专用玻璃珠以获得更高的转化效率。涂布完成后，将平板正向培养1小时，再倒置在37℃培养14小时。如果您在30℃培养，则需延长至20小时。如果菌落过多，请在转化前将质粒进行稀释；如无菌落，需添加10微升质粒再进行转化。同时注意，感受态细胞不可直接转表达，需先转克隆感受态，提取质粒后再导入表达感受态。

在挑取单菌落时，将其接入LB液体培养基中，结合合适的抗生素，进行220 rpm摇床震荡培养14小时。请根据实验需求及质粒提取试剂盒说明书提取质粒。

产品运输与保存

该质粒在不同状态下有不同的运输和保存方式：

• 甘油菌种：使用冰袋运输，存储于-80℃，保质期为90天，务必划线挑单克隆培养。
• 穿刺菌种：使用冰袋运输，存储于4℃，保质期为7天，可进行液体培养后划线挑单菌落。
• 菌落平板：使用冰袋运输，存储于4℃，保质期为7天，直接挑取单菌落至液体培养基中。
• 液体质粒：使用冰袋运输，存储于-20℃，保质期90天，可直接使用。
• 滤纸质粒：常温运输，存储于-20℃，保质期90天，请确保转化并挑单克隆培养。

质粒提取原理与步骤

碱裂解法提取质粒根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的不同进行分离。在pH值为12到12.5的范围内，线性DNA解开并变性，而质粒DNA的互补链则紧密结合。随后，使用高盐缓冲液恢复中性pH时，质粒DNA会迅速复性，而线性DNA则形成网状结构，在离心后被沉淀去除。

提取步骤包括：

1. 准备灭菌过的培养管，加入LB培养基和相应抗生素。
2. 挑取单个菌落，37℃震荡培养过夜。
3. 离心获取菌液，并去掉上清。
4. 添加Buffer P1并混匀，悬浮菌体。
5. 添加Buffer P2，轻轻混合，获取裂解液。
6. 加入Buffer N3并离心，并小心转移上清液。
7. 经过吸附柱处理后，进行一系列洗涤步骤，最后溶出质粒。

在使用尊龙凯时的提取试剂盒前，请将一小管RNA酶加入Buffer P1并存储于4℃，并在提取过程中保持Buffer EB在65-70℃预热，以提高提取效率。如需获取更多质粒载体，请及时咨询尊龙凯时。